大鼠環(huán)磷酸鳥苷ELISA 檢測試劑盒內(nèi)容及操作
試劑盒內(nèi)容及其配制
| 試劑盒成份（2-8℃保存） | 96孔配置 | 48孔配置 | 配制 |
| 96/48人份酶標板 | 1塊板（96T） | 半塊板（48T） | 即用型 |
| 塑料膜板蓋 | 1塊 | 半塊 | 即用型 |
| 標準品：800nmol/L | 1瓶（0.6ml） | 1瓶（0.3ml） | 按說明書進行稀稀 |
| 空白對照 | 1瓶（1.0ml） | 1瓶（0.5ml） | 即用型 |
| 標準品稀釋緩沖液 | 1瓶（5ml） | 1瓶（2.5ml） | 即用型 |
| 生物素標記的抗cGMP抗體 | 1瓶（6ml） | 1瓶（3.0ml） | 即用型 |
| 親和鏈酶素-HRP | 1瓶（10ml） | 1瓶（5.0ml） | 即用型 |
| 洗滌緩沖液 | 1瓶（20ml） | 1瓶（10ml） | 按說明書進行稀釋 |
| 底物A | 1瓶（6.0ml） | 1瓶（3.0ml） | 即用型 |
| 底物B | 1瓶（6.0ml） | 1瓶（3.0ml） | 即用型 |
| 終止液 | 1瓶（6.0ml） | 1瓶（3.0ml） | 即用型 |
| 標本稀釋液 | 1瓶（12ml） | 1瓶（6.0ml） | 即用型 |
操作注意事項
1． 試劑應(yīng)按標簽說明書儲存，使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標準品應(yīng)丟棄，不可保存。
2． 實驗中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質(zhì)。
3． 不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。
4． 使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時，避免使用帶金屬部分的加樣器。
5． 使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。
6． 洗滌酶標板時應(yīng)充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標反應(yīng)孔中吸水。
7． 底物A應(yīng)揮發(fā)，避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實驗完成后應(yīng)立即讀取OD值。
8． 加入試劑的順序應(yīng)一致，以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時間一樣。
9． 按照說明書中標明的時間、加液的量及大鼠環(huán)磷酸鳥苷ELISA 檢測試劑盒
樣品收集、處理及保存方法
1、 血清-----操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。收集血液后，1000×g離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2、 血漿-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。
3、 細胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
4、 組織勻漿-----將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘，取上清液
5、 保存------如果樣品不立即使用，應(yīng)將其分成小部分-70 ℃保存，避免反復(fù)冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒，檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
試劑的準備
1． 標準品：標準品的系列稀釋應(yīng)在實驗時準備，不能儲存。稀釋前將標準品振蕩混勻。稀釋比例按下表中進行：
| 800 nmol/L | （6號標準品） | 原倍濃度不用稀釋直接加入50ul。 |
| 400 nmol/L | （5號標準品） | 100ul的原倍標準品加入100ul的標準品稀釋液 |
| 200 nmol/L | （4號標準品） | 100ul的5號標準品加入100ul的標準品稀釋液 |
| 100 nmol/L | （3號標準品） | 100ul的4號標準品加入100ul的標準品稀釋液 |
| 50 nmol/L | （2號標準品） | 100ul的3號標準品加入100ul的標準品稀釋液 |
| 25 nmol/L | （1號標準品） | 100ul的2號標準品加入100ul的標準品稀釋液 |
| 0 nmol/L | （空白對照） | 原始濃度不用稀釋直接加入50ul。 |
2． 洗滌緩沖液（50×）的稀釋：蒸餾水50倍稀釋。
操作步驟
1． 使用前，將所有試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫，以免加樣時加入大量的氣泡，產(chǎn)生加樣上的誤差。
2． 根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標準品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個標準品和空白孔建議做復(fù)孔。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定，能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。標本用標本稀釋液1：1稀釋后加入50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。
3． 加入稀釋好后的標準品50ul于反應(yīng)孔、加入待測樣品50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。立即加入50ul的生物素標記的抗體。蓋上膜板，輕輕振蕩混勻，37℃溫育1小時。
4． 甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機洗滌，洗滌次數(shù)增加大鼠環(huán)磷酸鳥苷ELISA 檢測試劑盒
5． 每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP，輕輕振蕩混勻，37℃溫育30分鐘。
6． 甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。
7． 每孔加入底物A、B各50ul，輕輕振蕩混勻，37℃溫育10分鐘。避免光照。
8． 取出酶標板，迅速加入50ul終止液，加入終止液后應(yīng)立即測定結(jié)果。
9． 在450nm波長處測定各孔的OD值。
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